FACSAria III (Becton Dickinson)
El equipo BDFACSAria IIITM es un separador y analizador de partículas de alta velocidad y resolución, capaz de analizar de forma sencilla hasta 13 parámetros a la vez, 11 de ellos de fluorescencia (5B+·3R+·3V).
El ajuste automático de drop delay y la monitorización automática del sorting mediante software, permite establecer un drop delay exacto y así asegurar la obtención de una alta reproducibilidad en la separación, y la mejora notable de la productividad y la pureza.
Capaz de realizar un control de calidad exhaustivo del equipo (CS&T) para seguimiento, verificación y detección de problemas.
Especificaciones técnicas
Cubeta de cuarzo cuadrada acoplada a un gel óptico, lo que maximiza la recogida de señal y por tanto la sensibilidad del equipo.
Excitación y detección:
Láseres ( totalmente prealineados):
- un láser de 488 nm refrigerado por aire, luz de excitación dirigida por fibra óptica hacia los prismas de enfoque y hacia la cámara de detección.
- Un láser de 633 nm refrigerado por aire, luz de excitación dirigida por fibra óptica hacia los prismas de enfoque y hacia la cámara de detección.
- Un láser de 405 nm refrigerado por aire, luz de excitación dirigida por fibra óptica hacia los prismas de enfoque y hacia la cámara de detección.
Filtros del sistema/ fluorocromos detectados:
Para el Láser 488 nm:
- 530/30-nm FITC, GFP
- 582/15-nm PE
- 616/23-nm PE-Texas Red®, propidium iodide
- 695/40-nm PerCP-Cy5.5 , PE-Cy5.5
- 780/60-nm PE-Cy7
Para el Láser 633 nm:
- 660/20-nm APC
- 730/45-nm Alexa fluor®
- 780/60-nm APC-Cy7 o APC-H7
Para el Láser 405 nm:
- 450/50-nm BD Brilliant Violet 421, BD Horizon™ V450, Pacific Blue™, DAPI
- 510/50-nm BD Brilliant Violet 510, BD Horizon V500, AmCyan
- 610/20-nm BD Brilliant Violet 605
Sistema de detección óptica de octágonos y trígonos basado en la detección inicial de longitudes de onda largas, menos energéticas, y acabando con la detección de longitudes de onda cortas, más energéticas. Esto permite tener buena sensibilidad en señales procedentes de longitudes de onda más débiles (longitudes de onda larga) al ser detectadas primero y evitando así la pérdida de señal resultante del paso a través de los filtros. Este sistema es común a otros analizadores de BD.
- Las señales de Fluorescencia son recogidas por tubos foto multiplicadores de alto rendimiento (Hammamatsu) dentro de un rango espectral entre 200 NM y 800 NM.
- La señal de Side scatter es recogida por tubo fotomultiplicador
- La señal de Forward Scatter es recogida por un fotodiodo
Sistema Electrónico
Es un sistema TOTALMENTE DIGITAL, integrando las siguientes capacidades:
- La digitalización de todas las señales (fluorescencias y dispersiones) de forma continua al nivel de los detectores (10 millones de medidas de señal por segundo), y con anterioridad a la amplificación de las mismas.
- Se elimina el tiempo muerto electrónico (“electronic dead time”) en el procesamiento de las señales, incrementando así el rendimiento real de separación celular en un 10% sobre cualquier sistema en el que existe la limitación del tiempo muerto electrónico, agilizando la velocidad de procesamiento y facilitando las decisiones de “sorting”.
- Resolución de 262.144 canales.
- Compensación total intra e interláseres para todos los parámetros, tanto “on-line” como “off-line”.
- Procesamiento de todas las señales de células alcanzando una velocidad de 70.000 células por segundo gracias a sus Digital Signal Processors
Fluidos
Suministra presión positiva hasta 100 PSI y vacío, independiente del equipo, en un carro de fluidos, que contiene:
- un contenedor de líquido envolvente de 10 litros autoclavable. Presión regulable de 5 a 75 psi.
- contenedores de 5 litros para diferentes programas de limpieza y sorting aséptico.
- Monitorización de la estabilidad de los fluidos por programa informático.
Sistema de Separación Celular (“Sorting”)
- Sorting de cuatro vías
- Cuatro poblaciones celulares simultáneamente
- Condiciones de separación diferentes para cada población celular
- Sistema de enfriamiento/calentamiento para los tubos o placas de recogida de muestra
- Unidad de clonaje (Automatic Cell Deposition Unit ACDU) para separación automática de células en placas o portas incluida.
- Posibilidad de depositar células en placas hasta 384 pocillos, portas, tubos ependorf o cualquier otro soporte similar.
- Permite una separación en condiciones de esterilidad
- Ciclos de limpieza y sorting aséptico automatizados.
- Una cámara de toma de muestra totalmente cerrada y bajo presión negativa
- Zona de recogida de muestra separada protegida.
Cámara de toma de muestra, que admite una gran variedad de tipos de tubos incluyendo microtubos, tubos de 12 X 75 mm, y tubos de 15 ml., con agitación automática de la muestra y control de la temperatura de adquisición ( 4, 20, 37 y 42ºC) ,programables por software.